样本采集与处理

保持样本活性：样本采集后应尽快处理，减少在非生理环境下的时间。例如，对于肿瘤组织样本，最好在手术切除后 1 - 2 小时内开始处理。可以将样本保存在含有适当缓冲液或培养基的无菌容器中，置于冰上运输，以维持细胞活性。

严格无菌操作：在样本处理过程中，如组织切割、酶消化等步骤，必须在无菌超净台内进行。使用的器械和试剂都要经过严格消毒，避免细菌、真菌或支原体污染。例如，在处理肠道组织样本时，对剪刀、镊子等器械要进行高温高压灭菌。

精准组织消化：消化酶的选择和使用浓度、时间要根据样本类型精准控制。过度消化可能会破坏细胞表面受体和细胞间连接，影响类器官的形成。比如，对于肝脏组织样本，胶原酶消化时间过长可能导致肝细胞损伤，一般消化时间控制在 30 - 60 分钟为宜。

培养基与营养物质

合适的培养基配方：根据不同类器官的特性选择或定制培养基。例如，肠道类器官培养需要添加表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）等生长因子，以及 N - 乙酰半胱氨酸（NAC）等抗氧化剂。培养基的成分和比例要准确配制，确保营养物质和生长因子的浓度合适。

营养物质补充与更新：定期更换培养基，一般 2 - 3 天更换一次，以保证类器官持续获得充足的营养和生长因子。同时，要注意营养物质的添加顺序和方式。例如，在添加一些对光、热敏感的营养成分时，要尽量避免强光照射和温度过高。

培养环境条件

件温度和气体浓度控制：类器官通常在 37°C、5% CO₂的环境下培养。培养箱的温度和二氧化碳浓度要定期校准，确保环境稳定。例如，温度波动可能会影响细胞代谢和类器官的生长速度，二氧化碳浓度异常会导致培养基 pH 值改变，影响细胞生存。

防止污染和震动干扰：保持培养环境的清洁，避免灰尘和微生物污染。同时，要将培养容器放置在平稳的位置，减少震动。例如，频繁的震动可能会破坏类器官的结构，影响其正常发育。

细胞间相互作用与基质支持

模拟体内微环境：在培养过程中，要考虑细胞间的相互作用和细胞与基质的关系。可以添加细胞外基质成分，如 Matrigel，来模拟体内的细胞外基质环境。Matrigel 的浓度和使用量要根据类器官的类型和实验目的进行调整，以提供合适的支撑和信号传导。

共培养体系建立（如果需要）：对于一些复杂的类器官培养，可能需要建立共培养体系，如将免疫细胞与上皮类器官共培养。在这种情况下，要注意细胞比例、接种顺序和相互作用方式，以确保共培养体系的稳定性和有效性。

观察与监测

定期形态观察：使用倒置显微镜定期观察类器官的形态、大小和结构变化。记录类器官从初始细胞聚集到形成三维结构的过程，以及是否出现异常形态，如坏死、空泡化等现象。例如，正常的肠道类器官呈球形或囊状，有明显的腔结构。

功能检测与标志物分析：结合免疫组化、基因表达分析等方法，检测类器官的功能标志物。例如，检测肠道类器官的肠碱性磷酸酶（IAP）表达，来评估其肠上皮细胞的功能状态。根据检测结果及时调整培养条件。